初步探讨线粒体自噬对肺泡巨噬细胞（AM）焦亡的调控作用及其机制。

选取大鼠肺泡巨噬细胞NR8383作为研究对象，使用1 μg/ml的脂多糖（LPS）刺激18 h构建脓毒症肺损伤体外模型，使用低浓度溴化乙锭（EtBr）处理大鼠AM构建胞质无线粒体DNA（mtDNA）的ρ0细胞，使用羟基氰氯苯腙（CCCP）增强线粒体自噬，通过转染上调胞质mtDNA水平。设立CON组、LPS组、LPS+ρ0组、LPS+CCCP组、LPS+CCCP+mtDNA组；采用qRT-PCR检测mtDNA拷贝数、胞质mtDNA水平；通过酶联免疫吸附测定（ELISA）检测细胞培养上清液中白介素（IL）-18、IL-1β等炎症因子的分泌水平；采用Western Blot检测NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）、胱天蛋白酶1前体（pro-caspase-1）、胱天蛋白酶1剪切体（P20）、消皮素D（GSDMD）和消皮素D剪切体（cle-GSDMD）等焦亡相关蛋白的表达水平；采用免疫荧光观察细胞内caspase活性及细胞膜通透性；采用透射电镜观察细胞内线粒体自噬水平；采用Western Blot检测微管相关蛋白轻链B（LC3B）Ⅱ型、LC3BⅠ型等自噬相关蛋白表达水平。

LPS刺激可诱导mtDNA释放至胞质，并促进炎症因子水平、焦亡相关蛋白表达水平、细胞内caspase活性及细胞膜通透性显著升高。通过CCCP增强线粒体自噬可抑制LPS诱导的IL-18（P＜0.01）、IL-1β（P＜0.01）等炎症因子及NLRP3（P＜0.001）、P20（P＜0.05）、cle-GSDMD（P＜0.01）等焦亡相关蛋白表达水平的上调，并抑制caspase活化及细胞膜透化。而转染外源性mtDNA可逆转CCCP的作用，诱导IL-18（P＜0.05）、IL-1β（P＜0.01）等炎症因子及NLRP3（P＜0.001）、P20（P＜0.05）、cle-GSDMD（P＜0.05）等焦亡相关蛋白表达水平升高，并活化caspase，增加细胞膜通透性。

增强线粒体自噬可通过降低胞质mtDNA水平抑制LPS诱导的大鼠AM焦亡，减轻炎症反应。

探讨血管紧张素转换酶2（ACE2）对人肺微血管内皮细胞（HPMECs）炎性损伤的调控作用。

利用原代培养HPMECs，构建脂多糖（LPS）损伤模型，（1）量效实验：分别用终浓度为50、100、500、1000 ng/ml的LPS刺激HPMECs 24 h，采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞活性，采用乳酸脱氢酶（LDH）法检测细胞损伤程度，采用蛋白质印迹实验（Western Blot）检测ACE2的表达情况；（2）以ACE2激动剂DIZE（或ACE2抑制剂MLN-4760）预培养HPMECs后加入LPS再培养24 h，同时设空白对照组（CTRL，正常内皮细胞培养基）及LPS、激动剂（或抑制剂）单独处理组，收集细胞培养上清液，采用LDH法检测细胞损伤程度，采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定上清液中白介素（IL）-1β、IL-6水平，采用Western Blot法测定ACE2及MasR蛋白表达情况。

在LPS刺激24 h后，与CTRL组比较，HPMECs细胞活力下降，且随着LPS浓度的升高，细胞活力下降明显（P＜0.001）；ACE2蛋白表达增加，以100 ng/ml组ACE2增加最为显著（2.24±0.57），差异均有统计学意义。与LPS组比较，LPS+DIZE组LDH相对释放活性降低（P＜0.0001），炎症因子IL-1β、IL-6释放减少（P＜0.01），MasR蛋白表达升高（P＜0.01），差异均有统计学意义。与LPS组比较，LPS+MLN-4760组LDH相对释放活性增加（P＜0.01），炎症因子IL-1β、IL-6释放增加（P＜0.05），ACE2、MasR蛋白表达均降低（P＜0.0001），差异均有统计学意义。

LPS诱导HPMECs细胞损伤模型中ACE2表达上调，ACE2功能活化有利于增强MasR表达，减少炎症因子释放，在体外表现为对LPS所诱导的细胞损伤的保护作用。

观察电阻抗成像技术（EIT）用于监测急性呼吸窘迫综合征（ARDS）模型局部复张/过度膨胀比值（RI ratio）的可行性。

健康巴马猪6只，通过油酸静脉滴入的方法建立ARDS模型，呼气末正压（PEEP）为5 cmH₂O的情况下，氧合指数＜200 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa），并稳定维持30 min，即模型建立成功。模型成功后进行一次肺复张，在PEEP 15 cmH₂O（1 cmH₂O=0.098 kPa）水平下通气1 h，通过慢吐气的方法将PEEP由15 cmH₂O降至5 cmH₂O再通气1 h，全程进行EIT监测，实验结束后进行离线分析。肺从腹侧到背侧划分为2个“感兴趣区（ROI）”，通过EIT计算复张容积（Vrec）、整体RI ratio，并计算局部的Vrec和局部的RI ratio。

所有的实验动物均达到了ARDS的标准，造模后的氧合指数明显低于造模前，差异有统计学意义［（151.7±13.4）mmHg vs（422.5±49.9）mmHg，t=14.100，P＜0.001］。所有实验动物的RI ratio为1.59（1.42，1.67），6只动物的整体RI ratio、非重力依赖区和重力依赖区RI ratio分别为：1.83、1.03、2.06，1.68、1.51、2.28，1.64、0.98、1.83，1.23、0.93、1.33，1.38、0.02、1.27，1.55、1.41、1.99。

通过EIT监测ARDS患者的局部RI ratio，可提供更多分区复张性的信息。

探讨肺表面活性蛋白-D（SP-D）在高原肺水肿发生发展中的表达及作用。

将64只Wistar雄性大鼠随机分为4组，正常对照组（16只，586 m室温饲养），低压低氧24 h、48 h及72 h组（各16只，于模拟海拔6000 m低压低氧舱内分别饲养24 h、48 h及72 h），取右侧肺组织行HE染色，观察肺组织损伤情况，收集左侧肺组织肺泡灌洗液，采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中SP-D、白介素（IL）-1β、IL-6、C反应蛋白（CRP）及肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量。

成功建造高原肺水肿动物模型；与正常对照组相比，低压低氧24、48、72 h组肺组织病理评分升高，差异有统计学意义（P＜0.05）；SP-D含量均有所下降，IL-1β、IL-6、CRP、TNF-α含量均上升，且各组间两两比较差异均有统计学意义（P＜0.05）；BALF中SP-D含量与肺组织病理评分呈负相关（r=-0.687，P＜0.05），炎症因子IL-1β、IL-6、CRP及TNF-α与肺组织病理评分均呈正相关（r=0.705，P＜0.05；r=0.728，P＜0.05；r=0.733，P＜0.05；r=0.737，P＜0.05）。

SP-D在高原肺水肿的发生发展中起着一定的作用，其可能是防治高原肺水肿的新靶点。

探讨鸟嘌呤核苷酸腺嘌呤核苷酸合成酶（cGAS）/干扰素激活蛋白（STING）通过NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎性小体调控人肺微血管内皮细胞（HPMVECs）炎症的作用机制。

原代培养HPMVECs，进行脂多糖（LPS）量效实验及cGAS、STING和NLRP3抑制干预实验。（1）量效实验：以50、100、1000 ng/ml的LPS作用24 h后（分别为50 ng/ml LPS组、100 ng/ml LPS组、1000 ng/ml LPS组），用实时荧光反转录-聚合酶链反应（qRT-PCR）和蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）分别检测cGAS、STING和NLRP3表达。（2）cGAS抑制干预实验：使用cGAS（siRNA）转染，再加入100 ng/ml的LPS处理24 h；同时设立空白对照组、LPS刺激组、siRNA单独处理组，采用Western Blot检测STING、NLRP3，及NLRP3下游因子白介素（IL）-1β和IL-18的表达。（3）STING抑制干预实验：使用STING（siRNA）转染，再加入100 ng/ml的LPS处理24 h；同时设立空白对照组，采用Western Blot检测cGAS、NLRP3，及NLRP3下游因子IL-1β和IL-18的蛋白表达。（4）NLRP3抑制干预实验：使用NLRP3炎性小体抑制剂MCC950预处理30 min，再加入100 ng/ml的LPS处理24 h；同时设立空白对照组，采用Western Blot检测cGAS、STING，及NLRP3下游因子IL-1β和IL-18的蛋白表达。

（1）量效实验：与空白对照组比较，HPMVECs中cGAS、STING、NLRP3的mRNA水平和蛋白表达均显著升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。（2）cGAS抑制干预实验：与空白对照组比较，LPS刺激HPMVECs，cGAS表达水平显著升高，差异有统计学意义（P＜0.05）；与LPS刺激组比较，抑制cGAS时，siRNA＋LPS处理组STING、NLRP3及其下游因子IL-1β、IL-18的表达水平均显著降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。（3）STING抑制干预实验：与空白对照组比较，LPS刺激HPMVECs，STING表达水平显著升高，差异有统计学意义（P＜0.05）；与LPS刺激组比较，抑制STING时，NLRP3及其下游因子IL-1β、IL-18的表达水平均显著降低，差异有统计学意义（P＜0.05），而cGAS的表达水平无显著降低（P＞0.05）。（4）NLRP3抑制干预实验：与空白对照组比较，LPS刺激HPMVECs，siRNA＋LPS处理组NLRP3表达水平显著升高，差异有统计学意义（P＜0.05）；与LPS刺激组比较，抑制NLRP3显著降低了NLRP3下游因子白细胞IL-1β和IL-18的表达，差异有统计学意义（P＜0.05），而cGAS和STING的表达水平无显著降低；差异无统计学意义（P＞0.05）。

（1）LPS刺激下，在HPMVECs中cGAS、STING、NLRP3、IL-1β和IL-18的表达水平均显著升高，参与调控炎症反应；（2）cGAS/STING/NLRP3信号通路顺序参与调控PMVECs炎症作用。

应用分层电阻抗成像技术（EIT）比较肺内源性急性呼吸窘迫综合征（ARDSp）和肺外源性急性呼吸窘迫综合征（ARDSexp）模型猪的肺复张性。

健康巴马猪16只，随机分为ARDSp组和ARDSexp组，每组各8只。采用盐酸气管吸入的方法复制ARDSp模型，油酸静脉滴注的方法复制ARDSexp模型。模型复制成功后，采用肺保护性通气策略进行机械通气并进行一次肺复张，之后保持其他呼吸机参数不变，分别在高低呼气末正压（PEEP）25 cmH₂O和5 cmH₂O水平下通气1 h，通气结束后进行吸气末和呼气末暂停，记录高低PEEP水平间的复张容积、每个PEEP水平下的氧合情况及血流动力学参数。

ARDSexp组和ARDSp组模型的复张容积为分别为（1572.8±314.9）ml和（1089.9±224.2）ml，差异有统计学意义（P=0.003）。升高PEEP能够改善ARDSexp的氧合指数，由（214.3±128.6）mmHg提高到（447.5±96.0）mmHg，差异有统计学意义（P=0.004），而ARDSp高低PEEP水平间氧合指数变化不显著，差异无统计学意义［（173.6±112.0）mmHg vs （178.4±128.2）mmHg，P=0.943］。

ARDSexp和ARDSp模型猪的复张性不同，相比ARDSp，ARDSexp的复张性更好。高PEEP水平可能能够改善ARDSexp的氧合，而对ARDSp的效应相对不显著。

阐明乌司他丁（UTI）对炎症状态下血管内皮屏障功能的影响及具体分子机制。

以人脐静脉内皮细胞系EA.hy926为研究对象，建立炎症细胞模型及RhoA过表达细胞模型，分别用UTI和TNF-α处理细胞，采用Transwell法、TEER法检测细胞通透性；Western Blot法及RT-PCR法检测Rho/ROCK信号通路相关关键分子（RhoA、ROCK2、MYPT1、p-MYPT1及VE-cadherin）的表达变化情况。

与正常对照组相比，TNF-α作用后EA.hy926细胞电阻值明显降低，细胞通透性显著升高，差异具有统计学意义[（33.67±4.04）Ω/cm² vs（67.17±3.81）Ω/cm²，t=10.435，P<0.01]，细胞内RhoA、ROCK2、p-MYPT1的表达量明显增加，差异具有统计学意义（均P<0.05），VE-cadherin的表达量明显降低，差异具有统计学意义（P<0.05），而UTI可逆转上述变化情况；与UTI处理组相比，RhoA过表达细胞模型中RhoA、ROCK2及p-MYPT1的表达显著增高，VE-cadherin表达降低，细胞通透性增加，差异具有统计学意义（均P<0.05），而空载病毒组中上述分子的表达水平以及细胞通透性无明显变化，差异无统计学意义（均P>0.05）。

UTI能通过Rho/ROCK信号通路抑制TNF-α引起的血管内皮细胞通透性增加，改善血管内皮屏障功能障碍。

使用相关定律或数学关系，推导出CVVH不同稀释模式与不同位置处的压力、流量、阻力三者之间的数学关系，以此来更好地理解CRRT的运行与压力信息的分析。

根据欧姆定律、泊肃叶定律、肾小球滤过率，推导出前置换、后置换、前后置换联合三种情况下，滤器、滤膜、静脉壶、深静脉导管四个位置的相关指标间关系。

1．在滤器部位：（1）滤器前后的压力差取决于流经滤器的流量及滤器阻力。（2）滤器阻力主要取决于流经滤器的混合溶液的黏滞度，及毛细小管的直径、数量。2.在滤膜部位：跨膜压（静水压）与跨膜流量（滤液）、滤膜的面积、滤膜的通透性、及滤器内的胶体渗透压有关。3.在静脉壶和静脉导管部位：滤器后压力（回路端压力）主要反应静脉壶与静脉导管的阻力。

将CRRT之CVVH模式运行相关的所有数据以公式形式列出，可以更直观的分析各个因素之间的相关性，简单易懂，全面不易遗漏，有良好普及性，可以帮助临床更好地操作分析CRRT。

观察卡巴胆碱对内毒素血症小鼠肠道屏障功能的保护作用及机制。

将C57BL/6小鼠随机分为对照组、内毒素血症组、卡巴胆碱组、α银环蛇毒素组，每组10只。腹腔注射10 mg/kg内毒素建立内毒素血症模型。模型制备后15 min腹腔注射卡巴胆碱0.1 mg/kg或0.9%氯化钠溶液，内毒素注射后3 h处死动物。取距回盲瓣10 cm处回肠组织，光镜下观察回肠组织病理学改变，测定肠道组织通透性，检测紧密连接蛋白（Claudin-2）、肌球蛋白轻链激酶（MLCK）定位及蛋白含量等。

FITC-葡聚糖水平：对照组、内毒素血症组、卡巴胆碱组、α银环蛇毒素组分别为（2.33±0.51）μg/ml、（55.25±5.41）μg/ml、（19.27±3.53）μg/ml、（48.45±9.50）μg/ml，4组总体差异有统计学意义（F=111.8，P<0.05），其中内毒素血症组与对照组、内毒素血症组与卡巴胆碱组、α银环蛇毒素组与卡巴胆碱组比较，差异均有统计学意义（t分别为22.52、15.31、12.42，P均<0.05）。Claudin-2蛋白含量：对照组、内毒素血症组、卡巴胆碱组、α银环蛇毒素组分别为（0.82±0.08）μg/ml、（0.52±0.09）μg/ml、（0.77±0.05）μg/ml、（0.53±0.09）μg/ml，4组总体差异有统计学意义（F=11.61，P<0.05），其中内毒素血症组与对照组、内毒素血症组与卡巴胆碱组、α银环蛇毒素组与卡巴胆碱组比较，差异均有统计学意义（t分别为6.518、5.366、5.167，P均<0.05）。MLCK蛋白含量：对照组、内毒素血症组、卡巴胆碱组、α银环蛇毒素组分别为（0.58±0.07）μg/ml、（1.07±0.17）μg/ml、（0.69±0.11）μg/ml、（0.94±0.05）μg/ml，4组总体差异有统计学意义（F=12.64，P<0.05），其中内毒素血症组与对照组、内毒素血症组与卡巴胆碱组、α银环蛇毒素组与卡巴胆碱组比较，差异均有统计学意义（t分别为7.79、5.881、3.892，P均<0.05）。

卡巴胆碱对内毒素血症小鼠肠道屏障功能有保护作用，可降低肠道通透性，其机制可能与激活胆碱能抗炎通路有关。

探讨脓毒症急性肺损伤（ALI）时miR-155-5P对肺泡巨噬（MH-S）细胞白介素6、巨噬细胞炎性蛋白2（MIP-2）表达的调控作用及中性粒细胞迁移的影响。

培养小鼠MH-S细胞并将其分为对照组、脓毒症组和miR-155-5P抑制物组，miR-155-5P抑制物组预先通过miR-155-5P antagomir完成转染，采用脂多糖干预脓毒症组和miR-155-5P抑制物组12 h，应用RT-PCR检测3组MH-S细胞miR-155-5P、白介素6 mRNA和MIP-2 mRNA的表达，酶联免疫吸附实验检测细胞悬液中白介素6和MIP-2的浓度；再次将MH-S分为上述3组培养在transwell板的下室，CFSE荧光染料标记的中性粒细胞培养在上室，脂多糖干预后应用流式细胞术分别检测上室与下室细胞的荧光值，计算中性粒细胞的迁移率。

脓毒症组MH-S细胞的miR-155-5P（8.04±0.65）、白介素6 mRNA（57.05±6.88）和MIP-2 mRNA（52.98±2.58）较对照组（1.00±0.00、1.00±0.00、1.00±0.00）表达明显上调（P<0.05）；白介素6［（50.85±0.12）pg/ml］、MIP-2［（69.96±1.40）pg/ml］的浓度和中性粒细胞迁移率（64.36%）较对照组［（38.58±0.13）pg/ml、（56.00±0.29）pg/ml、30.98%］均显著增加（P<0.05）。而miR-155-5P抑制物组细胞的miR-155-5P表达（0.19±0.35）低于对照组（P<0.05），白介素6 mRNA（39.66±3.65）、MIP-2 mRNA（31.01±2.88）的表达及白介素6［（42.45±1.08）pg/ml］、MIP-2［（59.01±1.63）pg/ml］的浓度也高于对照组（P<0.05），而低于脓毒症组（P<0.05）。

脓毒症ALI时，肺泡巨噬细胞miR-155-5P基因高度表达，促炎因子白介素6 mRNA、MIP-2mRNA的表达均明显上调，其促进白介素6、MIP-2的产生，使中性粒细胞大量趋化迁移至肺内，造成肺损伤；而抑制miR-155-5P的表达，可以抑制白介素6、MIP-2的产生，从而减少中性粒细胞的趋化迁移，起到肺保护作用。

探讨运用可视化穿刺系统建立微创急诊腹部探查影像系统的可行性。

将微型光纤（0.9 mm）送入18G穿刺针中，建立可视化穿刺系统。在5只健康犬尸体模型中，比较运用可视化穿刺系统及传统腹腔镜行腹部探查所需穿刺时间及切口大小。

可视化穿刺系统能够提供较为清晰的腹腔内脏器影像学图像；与传统腹腔镜探查比较，可视化穿刺系统所需穿刺时间更少［（2.54±0.32）s vs. （9.65±0.60）s，P<0.001］，对受试对象造成的损害更小［切口大小（1.30±0.02）mm vs. （11.81±1.03）mm，P<0.001］。

可视化穿刺系统成像性能初步满足设计需求，该系统的建立可能为后期急诊腹部探查提供新的仪器平台。

观察机械牵张对人肺动脉内皮细胞（HPAEC）和人肺微血管内皮细胞（HPMVEC）通透性的影响及对通透性关键蛋白VE-cadherin、Claudin-5和Caveolin-1表达的调控。

采用机械牵张装置Flexcell FX-5000T对HPAEC（ATCC）和HPMVEC（ATCC）施加0.5 Hz频率10%或20%牵张应力。应用qRT-PCR及Western Blot方法检测机械牵张前后内皮通透性关键蛋白VE-cadherin、Claudin-5、Caveolin-1 mRNA和蛋白含量表达变化。采用细胞动态分析仪以及Transwell小室/异硫氰酸荧光素（FITC）-白蛋白法检测机械牵张后的HPAEC细胞和HPMVEC细胞通透性改变。

20%机械牵张后，与对照组比较，HPAEC细胞通透性关键蛋白VE-cadherin mRNA和蛋白表达、Claudin-5 mRNA和蛋白表达和Caveolin-1 mRNA表达均下降（P<0.05），而Caveolin-1蛋白水平较对照组无明显变化；HPMVEC细胞通透性关键蛋白VE-cadherin mRNA和蛋白表达，Caveolin-1 mRNA和蛋白表达均下降（P<0.05），而Claudin-5 mRNA和蛋白水平较对照组无明显变化。

机械牵张会导致肺血管内皮通透性增高，是通过下调通透性关键蛋白的表达，并且两种细胞的通透性影响机制有差异，HPAEC牵涉紧密连接，HPMVEC牵涉跨内皮细胞途径。

探讨微小核糖核酸155（miR-155）对脓毒症急性肺损伤（ALI）肺泡巨噬细胞白介素（IL）-6、IL-10及巨噬细胞炎性蛋白2（MIP-2）的影响。

健康清洁C57BL/6雄性小鼠（6~8周，18~20 g）15只，随机分为对照组、脓毒症组和miR-155 antagomir 3组，每组5只，其中miR-155 antagomir组小鼠中将miR-155 antagomir试剂经尾静脉注射，对照组和脓毒症组小鼠注射等量0.9%NaCl，观察24 h后，脓毒症组和miR-155 antagomir组采用盲肠结扎穿孔（CLP）法制备脓毒症ALI动物模型，对照组仅翻动盲肠进行对照，观察3组小鼠生命体征变化，模型制备6 h后，3组小鼠均取左肺下叶行苏木精-伊红（HE）方法进行染色，在光镜下观察肺病理形态变化，取右肺下叶检测干湿重比，应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆IL-6、IL-10、MIP-2浓度。

HE染色结果表明：脓毒症组和miR-155 antagomir组小鼠肺内均出现肺泡结构破坏、炎症细胞浸润、间质增厚、出血，miR-155 antagomir组肺组织炎性表现较脓毒症组显著减轻。3组干湿重比结果显示：脓毒症组干湿重比［（0.16±0.01）%］明显低于对照组［（0.22±0.01）%］和miR-155 antagomir组［（0.19±0.01）%］，miR-155 antagomir组低于对照组，差异具有统计学意义（均P<0.05）。ELISA结果显示：脓毒症组的血浆IL-6浓度［（171.35±10.41）pg/ml］、MIP-2浓度［（299.71±19.82）pg/ml］显著高于对照组［（125.74±4.41）pg/ml；（214.00±14.93）pg/ml］和miR-155 antagomir组［（144.41±6.29）pg/ml；（270.38±11.96）pg/ml］，IL-10浓度［（283.58±19.90 ）pg/ml］显著低于对照组［（370.27±15.41）pg/ml］和miR-155 antagomir组［（333.30±16.49）pg/ml］，miR-155 antagomir组的血浆IL-6、MIP-2浓度高于对照组，IL-10浓度明显低于对照组，差异具有统计学意义（均P<0.05）。

脓毒症ALI时miR-155过度表达，过度表达的miR-155能促进肺泡巨噬细胞释放大量促炎因子而抑制抗炎因子的表达，引起促炎因子及抗炎因子失衡，发生不可控炎症反应，而miR-155 antagomir能够拮抗miR-155的表达，抑制肺泡巨噬细胞释放促炎因子IL-6及趋化因子MIP-2，上调抗炎因子IL-10的表达，进一步抑制中性粒细胞及肺泡巨噬细胞聚集，防止产生更多的炎症介质，有效控制肺部炎症反应的发生，对肺起到一定的保护作用。

明确高呼气末正压（PEEP）条件下肺泡微循环的变化情况以及液体复苏在高PEEP情况下对肺泡微循环的影响。

选用北京当地的15条健康成年杂种狗进行实验，分别观察基线（PEEP 5 cmH₂O，1 cmH₂O=0.098 kPa）、高PEEP（平均动脉压下降≥20 mmHg，1 mmHg=0.133 kPa）及液体复苏后的呼吸、系统循环及肺泡微循环情况，肺泡微循环利用旁流暗视野成像（SDF）技术进行观察、留取视频结果，线下利用AVA3.2软件进行分析，不同条件下的实验数据之间的差异利用Wilcoxon秩和检验进行分析。

高PEEP可导致中心静脉压（CVP）升高（P=0.001）及心输出量（CO）下降（P=0.002），肺泡微循环表现为总微血管数量（TVDa，P=0.036）、灌注血管数量（PVDa，P=0.002）、灌注血管比例（PPVa，P=0.003）、血流状态（MFIa，P=0.002）显著下降，肺泡周围毛细血管密度下降不明显（TVDs，P=0.319）；液体复苏恢复整体循环后，微循环参数均无显著改善。

过高的PEEP水平可导致肺泡微循环的显著恶化，通过液体复苏不能改善由此产生的微循环障碍。

研究高压氧（HBO）治疗对大鼠重症中暑脑损伤模型认知功能障碍的保护作用。

将60只雄性SD大鼠随机分为空白对照组（Control组，10只）、重症中暑组（HS组，10只）、重症中暑＋高压氧治疗组（HS＋HBO组，10只）、重症中暑＋高压空气对照组（HS＋HBA组，10只）、高压氧对照组（HBO组，10只）、高压空气对照组（HBA组，10只），将HS组、HS＋HBO组、HS＋HBA组大鼠持续暴露于40℃热舱中，当核心体温达到42℃后取出复温，HS＋HBO组与HS＋HBA组复温30 min后分别给予HBO（2.5ATA，60 min）或高压空气（2.5ATA，60 min）处理，通过Morris水迷宫实验评估认知功能（航行距离和时间、目标象限航行时间百分比和通过次数），并检测各组大脑海马组织病理、神经功能评分及病死率变化。

HS组大鼠水迷宫寻找平台潜伏期较Control组明显延长［（45.84±0.13）s vs （22.16±1.40）s，t=-2.4，P=0.04］，寻找平台航行距离延长［（815.70±36.80）cm vs （177.71±21.00）cm，t=-3.3，P=0.01］，通过次数［（1.90±0.16）次 vs （5.80±0.20）次，t=3.7，P=0.04］和目标象限航行时间百分比［（32.12±0.19）% vs （57.12±1.60）%，t=2.8，P=0.02］明显减少；HBO治疗缩短了寻找平台的潜伏期［（30.21±1.50）s］与航行距离［（165.58±7.04）cm］，增加了穿越次数［（4.40±0.18）次］和目标象限航行时间百分比［（41.87±1.17）%］；HBO改善了HS组大鼠海马组织病理损伤程度，降低了中暑后2 h、24 h神经功能评分［2 h：（7.70±0.42）分 vs （9.60±0.31）分，t=6.3，P=0.00；24 h：（3.90±0.20）分 vs （5.60±0.23）分，t=2.4，P=0.02］及病死率（20.0% vs 40.0%，P=0.08），HS＋HBA组较HS组无明显改变，HBO组、HBA组较Control组无明显改变。

HBO可能是通过减轻重症中暑对海马的损伤来改善大鼠重症中暑模型的认知功能障碍。

探讨外源性一氧化碳释放分子2（CORM-2）对脂多糖（LPS）刺激人中性粒细胞杀菌功能的调控作用及其机制。

采集1名健康成年志愿者的静脉血，分离出中性粒细胞后，按随机数字表法分为正常对照组、LPS组、LPS＋10 μmol/L CORM-2组、LPS＋50 μmol/L CORM-2组、LPS＋无活性CORM-2（iCORM-2）组。正常对照组不进行任何处理；LPS组采用1 μg/ml的LPS刺激；LPS＋10 μmol/L CORM-2组、LPS＋50 μmol/L CORM-2组、LPS＋iCORM-2组在采用上述相同剂量LPS刺激的同时，分别采用10 μmol/L CORM-2、50 μmol/L CORM-2、50 μmol/L iCORM-2进行干预，常规培养1 h后检测相关指标。用琼脂糖趋化模型检测中性粒细胞的趋化功能，流式细胞仪检测细胞颗粒释放及吞噬功能，酶联免疫吸附试验（ELISA）监测中性粒细胞颗粒释放功能的改变，蛋白质印迹法检测磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路蛋白Akt磷酸化的表达水平。以上指标均重复测定3次，对数据行单因素方差分析、SNK检验。

正常对照组、LPS组、LPS＋10 μmol/L CORM-2组、LPS＋50 μmol/L CORM-2组、LPS＋iCORM-2组细胞的趋化距离分别为（2241.33±67.30）、（919.00±55.02）、（1784.33±17.79）、（2202.33±91.69）、（1000.00±55.02）μm，LPS组细胞趋化距离较正常对照组明显降低（P<0.01）；LPS组和LPS＋iCORM-2组细胞的迁移距离较正常对照组明显降低（P<0.05）；LPS＋10 μmol/L CORM-2组和LPS＋50 μmol/L CORM-2组细胞迁移距离较LPS组明显增加（P<0.01）；LPS＋iCORM-2组细胞细胞迁移距离与LPS组相近（P>0.05）。对于中性粒细胞四级颗粒的释放研究，LPS刺激后中性粒细胞的颗粒释放均发生了明显的增加，而使用10 μmol/L与50 μmol/L CORM-2干预后，中性粒细胞的颗粒释放均得到明显抑制（P<0.01）；使用50 μmol/L iCORM-2干预后中性粒细胞颗粒释放与LPS组相近（P>0.05）。用LPS刺激后中性粒细胞Phagocytosis平均荧光强度较正常对照组升高（P<0.05）；而使用10 μmol/L与50 μmol/L CORM-2干预后中性粒细胞Phagocytosis平均荧光强度较LPS组明显增高（P<0.01）；使用50 μmol/L iCORM-2干预后中性粒细胞Phagocytosis平均荧光强度为与LPS组相近（P>0.05）。LPS刺激后中性粒细胞蛋白Akt磷酸化与总Akt比值灰度扫描值比值与正常对照组相近（P>0.05）；而使用10 μmol/L与50 μmol/L CORM-2干预后中性粒细胞蛋白Akt磷酸化与总Akt比值灰度扫描值比值较正常对照组、LPS组明显增高（P<0.05）；使用50 μmol/L iCORM-2干预后中性粒细胞蛋白Akt磷酸化与总Akt比值灰度扫描值比值与LPS组相近（P>0.05）。

CORM-2干预可以明显增加LPS刺激后中性粒细胞的早期凋亡，恢复中性粒细胞的趋化功能，并促进中性粒细胞的吞噬功能。CORM-2调控LPS刺激后中性粒细胞凋亡与吞噬功能，其机制可能与CORM-2促进磷酸化Akt有关。

探讨神经降压素在内毒素（LPS）所诱导的小鼠急性肺损伤（ALI）中的保护作用，并明确其在炎症反应中的作用。

100只健康无特异病原级性C57BL/6小鼠（雄性50只，雌性50只），体质量（20~25 g），由上海南方模式实验动物中心提供。所有小鼠随机分为以下5组：①正常对照组：60 μl无菌磷酸缓冲盐溶液（PBS）滴鼻处理小鼠；②急性肺损伤模型组：60 μg/只LPS滴鼻处理；③20 mg/kg神经降压素组：先使用LPS诱导肺损伤，诱导后1 h通过尾静脉注射的方式给予20 mg/kg神经降压素处理；④40 mg/kg神经降压素给药组：先使用LPS诱导肺损伤，诱导后1 h通过尾静脉注射的方式给予40 mg/kg神经降压素处理；⑤80 mg/kg神经降压素给药组：先使用LPS诱导肺损伤，诱导后1 h通过尾静脉注射的方式给予80 mg/kg神经降压素处理。每组20只。肺损伤诱导后24 h，检测不同处理组小鼠肺损伤程度、髓过氧化物酶（MPO）活性、炎症细胞的浸润、肺水肿程度以及肺泡灌洗液中促炎症细胞的分泌水平。

与正常对照组相比，LPS的滴鼻处理显著提高了小鼠肺组织的损伤程度，包括MPO活性、炎症细胞的浸润、肺泡灌洗液内促炎症细胞因子［肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素（IL）-6、IL-1b以及单核细胞趋化因子（MCP）-1］的分泌等（P<0.05）；与内毒素诱导的急性肺损伤模型组相比，神经降压素的给药处理明显减轻了小鼠肺组织损伤的程度，包括MPO活性、炎症细胞的浸润、肺泡灌洗液内促炎症细胞因子（TNF-α、IL-6、IL-1b以及MCP-1）的分泌等（P<0.05），且这种保护性作用呈现剂量依赖性。

神经降压素能够有效减轻由内毒素诱导的ALI，其机制可能是通过封闭由速激肽所介导的炎症反应信号通路，进而减轻内毒素引起的炎症反应对肺组织所造成的炎症损伤来实现。

检测不同时间点脓毒症大鼠血清高迁移率族蛋白B1（HMGB1）及Toll样受体4（TLR4）浓度，探讨脓毒症炎症反应的可能机制，寻找脓毒症早期诊断的潜在生物标志物。

以盲肠结扎穿孔（CLP）法构建脓毒症大鼠模型，随机分为CLP组，HMGB1干预组，TLR4干预组，以假手术组（麻醉后开腹翻动盲肠后关腹）及空白组（不做任何处理的正常大鼠）为对照。于CLP术后2、4、8、12、24、48 h以酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测试验动物血清HMGB1及TLR4蛋白浓度，分析其时间-浓度关系。

CLP组各检测时间点血清HMGB1浓度较空白组及假手术组明显升高（P<0.05），于24 h达峰；予以HMGB1干预后，相比CLP组，其在术后4 h开始发挥作用，明显降低血清HMGB1浓度（P<0.05）；予以TLR4干预，相比CLP组，其在术后2~24 h内明显降低血清HMGB1浓度（P<0.05），相比HMGB1干预组，TLR4抑制发挥作用开始时间更早（2 h，P<0.05），作用更强（12、24 h，P<0.05）。血清TLR4蛋白浓度在CLP组呈双峰表达（8、24 h，P<0.05）；予以HMGB1干预，相比CLP组，其血清TLR4表达呈单峰（8 h，P<0.05）；予以TLR4干预，其血清TLR4变化较为复杂，再次呈现双峰状，峰值提前且增加（4、12 h，P<0.05）。

HMGB1可能通过TLR4信号通路发挥作用，脓毒症炎症级联反应、炎性细胞因子释放等信号转导通路是复杂的、相互交织的"cross-link"系统，单一改变某个/某些个信号转录调节因子作用有限。

探讨乌司他丁（UTI）对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导的血管内皮细胞通透性增高的影响及其主要分子机制。

离体培养人脐静脉内皮细胞系EA.hy926，分别以UTI和TNF-α作用于EA.hy926，小室法测单层细胞通透性，免疫荧光法测磷酸化肌球蛋白磷酸酶靶向亚基1（p-MYPT1）的表达；分别采用免疫细胞化学法、Western Blot法测与通透性相关的关键分子（RhoA、ROCK2、MYPT1、p-MYPT1及VE-cadherin）表达的变化情况。

TNF-α作用下EA.hy926单层细胞通透性增加，细胞内p-MYPT1的表达量较正常对照组明显增加，而UTI可改善EA.hy926细胞的上述变化情况；免疫细胞化学结果显示，与正常对照组比较，TNF-α作用下RhoA、ROCK2的表达明显增加，而UTI可抑制RhoA、ROCK2的高表达；Western Blot结果显示，与正常对照组比较，TNF-α作用下p-MYPT1、RhoA和ROCK2的表达明显增加，VE-cadherin的表达明显降低（均P<0.05），而UTI可抑制p-MYPT1、RhoA和ROCK2蛋白的高表达，增加VE-cadherin的表达。

UTI可能通过Rho/ROCK信号通路抑制TNF-α引起的EA.hy926细胞通透性增加。

探讨右美托咪定（DEX）对创伤性脑损伤（TBI）模型大鼠的神经保护作用、氧自由基清除及脑组织红系衍生的核因子相关因子2（Nrf2）-抗氧化反应原件（ARE）信号通路参与的机制。

选择健康成年雄性大鼠体重300~350 g构建TBI模型，将60只SD大鼠分为3组：假手术组（Sham组）、TBI组和TBI＋DEX组，每组20只。其中Sham组仅去除脑颅骨不打砸，TBI组和DEX组均采用改良自由落体装置制备TBI模型，随后在造模后1 h分别给予等量0.9%NaCl和DEX（100 μg/kg）处理。通过采用改良神经功能缺损评分（mNSS）评价神经功能，脑组织干湿重称量法评价脑水肿。使用酶活试剂盒检测损伤24 h后抗氧化酶超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）。最后使用免疫印迹试验（Western blot）和实时定量基因扩增荧光检测系统（RT-qPCR）的方法检测Nrf2-ARE信号通路及其下游分子血红素加氧酶1（HO-1）、醌氧化还原酶1（NQO-1）的表达水平，表达情况。

与TBI组相比，DEX组mNSS评分显著降低（P<0.05），DEX组能够明显减少脑水肿（P<0.05）；DEX组能够明显增加抗氧化酶SOD活性，降低氧化应激产物MDA的水平（P<0.05）。

DEX能够激活Nrf2-ARE信号通路诱导下游抗氧化/解毒酶等靶基因的表达，从而抑制氧化应激损伤发挥神经保护作用。